habe nach Tagen endlich verstanden, was wie wann und wo! ;D

Elektrophorese ist wahrscheinlich das von uns meist gemachte in der letzten Woche. ^^ Naja, jedenflld funktioniert das so, dass man ein Gel gießt, das "Taschen" auf dem einen Ende hat, und darin werden die Proben geladen, und dann an Stom angeschlossen. Die Idee dahinter ist, dass die DNA neg. geladen ist, und durch das Gel wandert. DA das Gel wie ein Gitter für die DNA ist, kommen kleinere DNA Teile schneller voran als größere, folglich kann man dadurch die Größe der DNA anhand eines Markers,dern man mitlaufen lässt, bestimmen. Hat am Anfang das voll kompliziert geklungen, mit allen Infos drum und dran, aer dann, wenn man das paar mal gemacht und durchgedacht hat, ist es voll logisch!^^

Enzyme könne vieles. Man benutzt sie, um Proteine zu zerstören, DNA zu zerschneiden, oder sonstiges. Wir haben sie bis jetzt nur benutzt, um DNA zu schneiden. Aber gestern haben wir welche benutzt, um Phosphatreste an den DNA-Enden zu entfernen.

Um die veränderte DNA in die Bakterien zu bekommen, macht man eine Elektroporation. Dafür mischt man die Bakterien und die DNA in einer Küvette. Diese wird mit Strom geschockt. Danach füllt man alles in ein Medium und lässt es für eine halbe Stunde stehen. Dann kann man die Bakterien auf einer LB-Agar-Platte ausstreichen.

Um kompetente Bakterien herzustellen, benötigt man ein mit Bakterien beimpftes LB-Medium. Man lässt diese Bakterien so lange wachsen, bis man eine optische Dichte von 0.5-1 haben. Dann zetrifugiert man das ganze, bis da ein Pellet zu finden ist, resuspendiert es, zentrifugiert es mit Wasser, usw. Als letzten Schritt nimmt man dann Glycerol. Danach teilt man es in kleine Eppis auf. Am Schluss, kurz bevor man die Bakterien in den Kühlschrank stellt, friert man sie zuerst mit flüssigem Stickstoff ein.