Wachstumskurven von Zellen: Ein weiterer Aspekt, den wir von RANK (bzw. RANKL) untersuchen wollen, ist dessen Einfluss auf das Zellwachstum, also wie oft sich Zellen in einer bestimmten Zeit teilen. Weil uns RANK im Zusammenhang mit dem Brustgewebe interessiert verwenden wir die Zelllinie MCF-10α. MCF-10α-Zellen sind humane Epithelzellen aus den Brustdrüsen. Um eine Zelllinie zu erhalten müssen die Zellen regelmäßig „gesplittet“ werden, da sie sich ja ständig vermehren und sie irgendwann aufgrund von Platz- und Nährstoffmangel sterben würden. Weil die Zellen am Boden unserer „Dishes“ haften, saugen wir das Medium einfach ab, waschen den Rest mit PBS und geben auf die Zellschicht etwas Trypsin. Trypsin löst die Zellen vom Boden und erlaubt uns dann, die Zellen und die Flüssigkeit (Medium, Trypsin) voneinander durch zentrifugieren zu trennen. Jetzt kann ein Teil der Zellen resuspendiert werden und hat damit genug Platz um weiter zu leben. Weil ich jetzt die Zellen zählen will, löse ich sie wie beim Splitten mit Trypsin von den Dishes, entnehme einen kleinen Teil (circa 10µl) und untersuche die Dichte der Zellen unter dem Mikroskop, indem ich sie auf eine „Zählplatte“ gebe. Die feinen Linien auf der Platte machen ein schnelles Zählen auf einer kleinen vorgegeben Fläche möglich und so kann man die Zelldichte leicht hochrechnen. In dem Bild habe ich die eher schwer erkennbaren Linien mit roter Farbe angedeutet.



Jetzt muss ich jeden Tag die recht langwierige Arbeit des Zählens verrichten und darf auf ein verwertbares Ergebnis hoffen. Wenn ich mir das richtig überlegt habe, sollte sehr wohl ein Unterschied feststellbar sein, da ja auch Cyclin D1 in die Signalkaskade von RANK involviert ist. Und weil dieses maßgeblich an der Proliferation der Zellen beteiligt ist gehe ich davon aus, dass Zellen, die mit RANKL stimuliert werden, sich schneller vermehren, als Zellen ohne RANKL. Das Ergebnis werden wir am Ende der Woche sehen!