Wir wollen überprüfen, ob ein bestimmtes Konstrukt in Transgenen Mäusen so funktioniert wie wir es erwarten. Es ist ein MMTV-RANK-IRES-Cre-Konstrukt (MMTV RIC). IRES ist eine Internal Ribosomal Entry Site. Nach der Transkription in mRNA kommen Ribosomen zum Einsatz, welche die Translation von mRNA zu Proteinen ermöglichen. IRES ist eine einfach eine „Anlaufstelle“ zwischen den beiden Sequenzen (RANK, Cre) für die Ribosomen um eine vollständige Translation der gesamten mRNA zu garantieren, da die Sequenz (RANK und Cre) insgesamt sehr lange ist. Mit Kreuzungen aus Mäusen mit diesem Konstrukt (Zum Beispiel RANK fl/Δ mit MMTV RIC) würde also folgendes passieren: Einerseits schneidet Cre das RANK-floxed-Allel heraus und damit wäre es eine Δ/Δ-Maus, also eine Knockout-Maus, aber in RIC haben wir ja auch noch eine neue transgene RANK Sequenz, welche durch MMTV expremiert wird. Vielleicht kompensieren sich die beiden Effekte? Das könnten wir zum Beispiel mit diesen Mäusen untersuchen. Zuerst müssen wir einige MMTV RIC Mäuse und Wildtypen als Kontrolle töten. Das machen wir mit der CO2-Kammer (mit Trockeneis), weil wenn wir ihnen das Genick brechen würden, könnten Organe beschädigt werden.

Wir wollen untersuchen, in welchen Organen RANK wie stark expremiert wurde. Dazu schneide ich Lunge, Herz, Leber, Thymus, Milz, Niere, Hoden/Uterus, Lymphknoten und Leber heraus und sie kommen in kleine beschriftete Plastikboxen:



Über Nacht kommen die Gewebe in eine Maschine, die das in den Organen enthaltene Wasser langsam gegen reinen Alkohol austauscht. Jetzt sind die Gewebe bereit, in Paraffin eingebettet zu werden. Eigentlich ganz leicht: Flüssiges Paraffin kommt in eine vorbereitete Kammer und diese wird auf eine gekühlte Platte gestellt. Nachdem sich die unterste Schicht Paraffin verfestigt hat, gebe ich das Gewebe hinein und nach einer Stunde kühlen ist der Paraffinblock mit dem Gewebe bereit geschnitten zu werden. Vuk aus dem Histolab hat mich extra eine Stunde das Schneiden gelehrt, da ich sonst nicht alleine arbeiten darf (Gefahr sich an den Klingen zu verletzen etc.). Aber die richtigen Schnitte unserer Gewebe werden wir erst morgen machen. Anschließend werden wir ein Staining auf Cre und RANK machen, ich bin schon gespannt…