Aufgabe dieser Woche ist es, ein von uns modifiziertes Konstrukt, d.h. bestehend aus Insert (in unserem Fall 3'UTR-Region mit Bindungsstelle für miRNA) und Vektor mit Luciferase, Promoter und Ampicillin -Gen, herzustellen bzw. es zu klonieren. Nachdem wir über Nacht unsere Primer (genauer: schon vorher mit dem Plasmid pMIR-reporter transformierte Bakterien-Kolonie) in Nährmedium bei 37°C inkubiert hatten, konnten wir heute den enormen Bakterienzuwachs mit einem speziellen Kit waschen und anschließend messen. Da die Konzentration der dsDNA nicht ausreichend genug war, erstellten wir eine höhere Konzentration, die mit 950 ng/ul ein zufriedenstellendes Ergebnis zeigte (auch da Verunreinigungen sich nicht in erhöhtem Ausmaß zeigten). Diese DNA-Konzentration ließen wir dann mit unseren Restriktionsenzymen HindIII und SpeI verdauen. (einmal nur mit HindIII, einmal nur mit SpeI, einmal doppelt geschnitten, einmal ungeschnitten)Unsere Absicht: das Plasmid so zu zerstückeln, dass ein Stück von ca. 60bp herausgeschnitten wird und zwar mit den Enzymen, die die sticky ends des Inserts darstellen. Wie der Verdau über Nacht funktioniert hat, werden wir morgen mittels Elektrophorese überprüfen.