Letzte Woche habe ich mich hauptsächlich mit den UV und Tunicamycin Versuchen beschäftigt.

Das Projekt, bei dem ich auf der Suche nach Tripelmutaten war, habe ich bereits vorletzte Woche abgeschlossen. Wie ich schon erwähnt habe, hatten die Tripelmutanten keinen spezifischen Phänotyp, der sie von den anderen Pflanzen unterschieden hätte.

Beim UV-Projekt habe ich die Pflanzen (bzw die Blätter der Pflanzen) in 70% Ethanol gebleicht, d.h. das Chlorophyll löste sich auf und die Pflanzen wurden gelblich. Man sah ganz deutlich die Blaufärbung, die ich unter dem Mikroskop untersuchte.
Es zeigte sich, dass das Gen bei manchen Pflanzen (mit Konstrukt) in den Wurzeln, bei manchen in den Blättern eingeschaltet wurde. Pflanzen, die nicht unter UV-Bestrahlung standen, zeigten gar keine Färbung.
Es hat sich auch gezeigt, dass Pflanzen, die länger unter UV-Bestrahlung standen, blauer waren, d.h. das Gen wurde stärker benötigt. Dies weist auf die Notwendigkeit des Gens 12 bei UV-Stress hin.

Der Tunikamycin-Versuch brachte eigentlich nur das Ergebnis, dass Pflanzen, die auf Tunicamycin-hältigen Medien wachsen, um einiges länger brauchen um zu keimen und die wachsen als Pflanzen die auf den natürlichen Nährstoffmedien wachsen.
Zwischen Wildtyp und Mutant gab es nicht wirkliche einen Unterschied.
Das bedeutet, dass das Gen (das die Mutanten nicht besitzten) wahrscheinlich keine wichtige Funktion Tunicamycin-Abbau einnehmen.

ich hatte bisher nicht sehr viel Zeit zu schreiben, da ich zur Zeit auch auf Wohnungssuche bin, deswegen hole ich das jetzt nach.
in der 2. Woche habe ich mich eigentlich nur mit PCR beschäftigt, da es nie ein Ergebnis brachte. Zuerst habe ich es erst einmal verstehen und lernen müssen (was gar nicht so einfach war). Und beim ersten Durchlauf hatte ich kein Ergebnis (nicht einmal die positiv Kontrolle hat funktioniert!). Somit begab ich mich auf Fehlersuche... ich hab alle Bestandteile erneuert und bei jedem neuen Durchgang einen anderen auf seine Richtigkeit geprüft. Am Ende hat sich herausgestellt, dass ich die Primer wahrscheinlich im falschen Verhältnis gemixt habe... Nun ja, Anfänger!
Aber jetzt funktioniert alles.
In der 3.Woche musste ich dann die 40 Pflanzen (mit funktionierenden Reagenzien) auf Wildtyp bzw. Mutant prüfen. Das war viel Arbeit. Dann hatte ich im Ergebnis 7 Doppelmutanten (man erwartete sich aber höchstens 3) somit musste ich 2.mal überprüfen, welche wirklich Mutanten sind. Im Moment habe ich immer noch 5, aber auch die Statistik unterliegt biologischen Schwankungen :). Diese Doppelmutanten können dann gekreuzt werden und nach Tripelmutanten gesucht werden; das werde ich aber leider nicht mehr erleben.

Ich hatte wirklich eine tolle erste Woche an der Boku. Ich habe sehr viele spannende Sachen gelernt und kann bereits alleine DNA isolieren. Wenn ihr Näheres zu meinem Projekt erfahren wollt besucht mich einfach. Würde mich interessieren ob es euch auch so gut gefallen hat.