So today haben wir Tumore aus WT und Knock-out Mäusen seziert und abgewogen um festzustellen ob die Tumore schneller wachsen und größer werden wenn ihnen STAT1 fehlt.

Achja, gestern haben wir zwei Bradford-Tests gemacht (der erste war nicht so ganz wie erwünscht) um eben die Proteinkonzentration unserer Proben zu bestimmen. welche wir dann Heute für unseren Western Blot brauchen.

Heute. Heute haben wir RNA aus den Proben von Freitag isoliert. Dazu haben wir die Proben durch verschiedene Filter laufen lassen und sie mit verschiedenen Alkoholen gereinigt. Mittels Reverser Transcriptase haben wir zur RNA die komplementäre, die c-DNA gebildet- weil die Primer die RNA nicht detektieren können. Dazu mussten wir natürlich vorher noch die "echte" DNA aufspalten und wegfiltern, weil uns dann falsche Ergebnisse rauskommen würden, wir wollen nur die RNA. Und jetzt heißt es warten während unsere Proben bei 42° vor sich hinschmoren.

Heute, durften wir selbst mal ran. Der Plan für heute war, die Epitelzellen aus dem Darm der Mäuse zu isolieren.
Angefangen hat es aber anderst. Ein Kollege aus der Vetmed hat für sein Forschungsprojekt das Knochenmark der Mäuse gebraucht. Das kann man leider nicht so "leicht" entnehmen wie bei den Menschen. Man nimmt es aus den großen Röhrenknochen, also den Ober und Unterschenkelknochen der Maus. Dazu muss man sie natürlich zuerst von ihrem irdischen Dasein erlösen. Dann kann man die Haut aufschneiden und die Beine "herauslösen" . Dann kann man erste dicke Muskelschicht einfach wegschneiden und dann den Knochen auf Beckenhöhe herausbrechen. Anschließend muss man sich der Sehnen und der Pfote entledigen, dann muss man nur noch das Fleisch weg"ziehen" und ab damit in eineLösung. Das durfte ich dann auch machen!
Als nächstes hat dann die eigentliche Arbeit begonnen, die ich machen sollte. Und zwar mit unseren Mäusen. Um die Epitelzellen zu isolieren muss man natürlich zuerst den Darm rausschneiden. Wir brauchen nur den Colon, den Dickdarm (und Blinddarm, der bei Mäusen riiiesig ist im vergleich zu Menschen). Den sollten wir dann auch reinigen und in Stücke schneiden, was eine ungeheure Feinarbeit ist. Aber ich hab flinke Händchen und hab gleich vier Mäuse gemacht. Dann haben wir unter den LaminAir, so einer sterilen Art Abzug könnte man sagen, die Zellen in verschiedenen Lösungen gereinigt und dann nach mehrmaligem zentrifugieren die Epitelzellen gewonnen. Aus diesen wollen wir dann die RNA isolieren. Übers Wochenende bleiben sie jetzt aber mal im -80° Kühlschrank. Und ich hatte Feierabend :)

Gestern waren wir im Labor in der Doktor Bohr Gasse. Dort haben wir. bzw. eben unsere Betreuerin die Mäuse seziert und die Därme, die wir ja für unser Forschngsprojekt brauchen, herausgeholt und prepariert. Es war sehr spannend dabei zusehen zu dürfen. Am Schluss haben wir dann eine Maus ganz seziert und uns alle Organe, inklusive dem Gehirn angesehen.
Auf der Vetmed haben wir jetzt auch die neuen Mäuse aus Himberg bekommen. Vielleicht dürfen wir Praktikanten ja bald auch selbst die Mäuse sezieren!

So dala. Am Montag hat mein Praktikum an der Vetmed bei der Eva Hainzl angefangen. Wir haben schon einige Methoden kennegelernt, allen voran den Western Blot. Dazu haben wir am Dienstag schon angefangen die Gels zu mischen und die Proteine aufzutragen. Vorm Feierabend haben wir dann die ersten Antiköper auftragen und diese über Nacht wirken lassen. Am Mittwoch haben wir dann nach gründlicher Reinigung der Membranen die zweiten Antikörper draufgetan und nach einstündiger Wartezeit die Photos entwickelt. Wie wir heute gesehen haben hatten wir eher ein schwaches Signal auf den Photos, deswegen behandeln wir die Membranen heute noch einmal mit Antikörpern und wiederholen die gestrige Prozedur.