Nachdem wir am Vortag Proteine aufgereinigt hatten (aufgrund eines sauren pH-Wertes), wurden heute wieder SDS-Gele mit den neuen Proben gefahren. Leider haben wir nicht ganz die Ergebnisse erzielt, die wünschenswert gewesen wären, doch hat Margret (die Diplomantin mit der ich mitarbeiten darf) diese Methode, d.h. über den pH-Wert aufreinigen, zuvor noch nicht angewendet gehabt. Daher wars mehr oder weniger ein "Blindversuch". Da wir nur die Gele gefahren sind, durfte ich früher gehen und bin dann auch gleich nach Wien nach Hause gefahren auf ein gemütliches Wochenende.

Heute durfte ich wieder Proteine aufreinigen, jedoch auf eine etwas unterschiedliche Art zum letzen Mal. Diesmal wurder versucht die Proteine mittels ph-Wert von den beads zu lösen. Wie es funktioniert hat weiß ich noch nicht. Wir werden erst morgen Gele fahren.

Den Tag haben wir begonnen mit einem erneuten Fahren von Gelen, dessen färben und entfärben. Sind zwar schöner gelaufen, aber die Ergebnisse waren leider nicht so schön wie die letzten.
Anschließend haben wir die Proteinkonzentration in den einzelnen Proben über ein Photometer bestimmt.

Bevor wir SDS-Gele fahren konnten, hieß es in der früh noch schnell fertig eluieren vom Vortag, dass eben möglichst viele Proteine sich von den beads lösen.
Dann wurden die Proben noch kurz aufgekocht und geschüttelt, um sie anschließend auf die Gele auftragen zu können.
Das Gel wird für ca. 1h laufen gelassen und anschließend mit blauem Farbstoff gefärbt, sodass unsere Proteine sichtbar werden.

Nach einem entspannenden Wochenende zu Hause, durfte ich heute wieder auf die Uni, um endlich Proteine aufreinigen zu dürfen. Hierzu wurden die Zellen mit Ultraschall beschallt und die Zelltrümmer, die dadurch entstanden sind abzentrifugiert. Anschließend wurde der Überstand auf beads (kleine Kugeln, die Protein an sich binden) aufgetragen und mehrmals gewaschen, so dass nur noch unser Protein an den beads gehangen ist. Sobald dies geschehen ist erfolgt das Eluieren, d.h. wir veranlassen die Proteine sich von den beads zu lösen, um möglichst viele von ihnen zu gewinnen.

Heute hieß es überprüfen der steril Kontrolle. (zum Glück ist nichts gewachsen :-) )
Die Zellen die wir über Nacht wachsen haben lassen, wurden in größere Kolben überführt und dort weiter bebrütet, bis sie eine gewisse Dichte aufgewiesen haben. Anschließend wurde das Wachstum der Bakterien gestoppt und sie so geleitet, dass sie unser gewünschtes Protein produzieren.

Wir haben Stammlösungen hergestellt, die wir im späteren Verlauf noch verwenden werden. Weiters bestand meine Aufgabe darin gemeinsam mit Margret (der Diplomantin) die Zellen die wir am Vortag transformiert haben in größeren Mengen zu züchten und eine steril Kontrolle durchzuführen, um sicher zu gehen, dass nur unser gewünschtes Bakterium wächst.

Seit Mittwoch arbeite ich mit einer Diplomantin zusammen. Wir versuchen Bakterien, in die Vektoren mit bestimmten Eigenschaften eingeschleust wurden, zu züchten.
Begonnen haben wir mit dem Herstellen von Medien, in denen die Zellkulturen wachsen werden.
Ebenso haben wir in bestimmte Bakterien (E.coli Bakterien) fremde DNA transformiert.