Ich hatte mit einem gemütlichen Frühstück einen tollen Start in die Arbeitswoche: trotzdem rief die Arbeit.

Als Erstes bereiteten Verena und ich eine qPCR (auch qRTPCR) vor. Wir testeten MPA-Tumore, welche durch Progesteron verursacht werden, und NeuT-Tumore, welche durch ein mutiertes Oncogen verursacht werden. Das mutierte Oncogen verursacht extreme Zellvermehrung.
Getestet wurden die Tumore auf RANK, RANKL, Progesteron receptor (RANKL wird durch Progesteron aktiviert), cyclinD1 (genauer beschrieben in den Methoden) und Actin (ist wichtig für das Zytoskelett und immer aktiv) als Referenz.
Es wurden wieder Mastermixe erstellt, nur diesmal genauer, da bei einer qPCR wesentlich genauer sein muss als bei einer normalen PCR. In den Mastermix kamen die passenden Primer, Wasser und SYBRgreen-Mix (-> Methoden).
Das ganze wurde dann in PCR-Platten pipettiert und dann in die qPCR-Maschinen gestellt. Auf einem verbundenen Computer wird ein Programm eingegeben und die Proben beschriftet. Die qPCR dauert mehrere Stunden. Das Ergebnis wird dann am Computer angezeigt.

Währenddessen bereitete ich ein (Elektrophorese)Gel vor, auf das die qPCR-Proben aufgetragen werden sollen. Magda teilte uns mit das die cblb Proben unserer letzten PCR falsch waren, und wir sie nochmal machen müssen, deshalb stand das Nachmittagsprogramm schon fest.

Nach dem Essen begann ich mit der Vorbereitung für die cblb-PCR. Das ging mittlerweile recht schnell. Wir stellten die PCR ins Gerät und machten uns auf zur qPCR.
Auf dem Computerbildschirm sahen wir dann die Kurven der qPCR. Eine probe hatte nicht funktioniert, aber das war nicht schlimm, da das an den Primern lag und wir die gleiche probe noch mit anderen Primern gemacht hatten. Froh über das Ergebnis wurden die Dateien noch in Excel gespeichert und meine qPCR-Kurven ausgedruckt.
Verena gab die Daten der qPCR in eine Excel Tabelle ein, um sie später vergleichen zu können und Schlüsse zu ziehen. ich ahbe das mitverfolgt, nur nach den ganzen Formeln und Verlinkungen bin ich bald ausgestiegen..
Aber das machte nichts, meine PCR war nämlich fertig. PCR und qPCR wurden nach allen Regeln der Kunst auf das Gel aufgetragen und die Elektrophorese gestartet.

Dann kam noch eine Theoriestunde und die ePhorese war schon fertig. Die qPCR konnte gut ausgewertet werden, doch leider ist bei der PCR etwas scheif gegangen und es war umsonst.. das ärgerte mich zwar aber Verena sagte das macht nichts und das das bei cblb oft vorkommt. Dann wurde mir noch mitgeteilt das wir morgen Mäuse operieren würden, und das 6 Stunden lang, und dann wurde ich entlassen. Bin gespannt was mich morgen erwartet.. ;)