Methoden / Experimente
11:32 / 18.06.2010
PCR
Diese PCR haben wir bei unserer 2. Klonierung verwendet , um unser Insert zu vervielfältigen.
10 mikro l 5x HF-Buffer
1 mikro l dNTPs ( "Bausteionen der DNA )
1 mikro l Primer sense
1 mikro l Primer antisense
1 mikro l Template ( also unser Insert)
1 mikro l Phusion Polymerase ( spezieller Polymerasenmix aus zwei verschiedenen Polymerasenenzymen )
35, mikro l Wasser
Alles zusammenpipettieren , in PCR-Tubes füllen und in PCR gerät geben.
Dann folgen :
Denaturierung : Bei 98°C trennen sich die DNA-Stränge
Annealing : 60°C , Primer legen sich an die DNA-Stränge an
Elongation : 72°C , Polymerase fängt zum arbeiten an und verdoppelt den DNA-Strang
Dieses wird dann 35 Zyklen lang wiederholt , bis man dann hoffentlich genügend Produkt hat .
Diese PCR haben wir bei unserer 2. Klonierung verwendet , um unser Insert zu vervielfältigen.
10 mikro l 5x HF-Buffer
1 mikro l dNTPs ( "Bausteionen der DNA )
1 mikro l Primer sense
1 mikro l Primer antisense
1 mikro l Template ( also unser Insert)
1 mikro l Phusion Polymerase ( spezieller Polymerasenmix aus zwei verschiedenen Polymerasenenzymen )
35, mikro l Wasser
Alles zusammenpipettieren , in PCR-Tubes füllen und in PCR gerät geben.
Dann folgen :
Denaturierung : Bei 98°C trennen sich die DNA-Stränge
Annealing : 60°C , Primer legen sich an die DNA-Stränge an
Elongation : 72°C , Polymerase fängt zum arbeiten an und verdoppelt den DNA-Strang
Dieses wird dann 35 Zyklen lang wiederholt , bis man dann hoffentlich genügend Produkt hat .
