...zur Auftrennung von Molekülen

Sammelgel

Trenngel 8%:2,6 ml Acrylamid
2,5 ml Lower Buffer
4,9 ml H2O
7,5 µl TEMED
45 µl 10%APS


1) Laufpuffer: 10x Elpho verwenden
2) Kamm rausgeben
3) Taschen spülen (mit Laufpuffer)
4) Proben auftragen
5) Wasserschläuche anstecken, Einschalten: 80 V (Konstant)

Hier findest du Platz für deine Forschungsdokumentation.

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In den bisher fast 2 Wochen habe ich festgestellt, dass Bakterien bzw. Zellen ganz schön anstrengend sein können!
Einerseits gibt es oft längere Wartezeiten in denen man praktisch nur die Zeit absitzt (zentrifugieren, inkubieren lassen ...usw.) und andererseits muss es manchmal ziemlich schnell gehen und man muss immer alles im Auge behalten, sodass sich manchmal nicht mal eine Mittagspause ausgeht. Im Labor muss man auf jeden Fall flexibel sein!

Plasmidisolierung
Wir haben eine Plasmidisolierung bei E.colis vorgenommen und zwar wie folgt:

Wir haben die E-colis (als Pellet) mit EDTA-Puffer resuspendiert und die Chemikalien NaOH und SDS dazugegeben. Dadurch werden die genomische DNA und die Plasmide (= ringförmige DNA) denaturiert (= unlöslich gemacht). Danach wird ein sogenannter Neutralisationspuffer hinzugegeben, der die DNA renaturiert (= wieder löslich macht). Die Plasmid-DNA renaturiert dabei schneller als die genomische DNA. Das "Gemisch" wird dann zentrifugiert, im Überstand befindet sich nun die isolierte Plasmid-DNA.