* Western Blot
* Bradford Test
* Zellen Splitten
* PCR
* Klonierung
* Agarose-Gelelektrophorese
* Dünnschichtchromatografie
* Massenspektrometer
* Microarray (RNA isolieren)
* Plasmidpräparation (Maxiprep und Miniprep)
* Zellen einfrieren (-180° in Isopropanol)
* Cell Viability Assay

ich weiß nicht wie viel es bringt alles theoretisch genau zu erklären, denn in Wiki bzw in google steht bereits alles.

Western Blot:

Eine Schicht Gel; + Isopropanol (verhindert Schaumbildung) und dann wegschütteln; + 2 Schicht Gel + Kamm (schief hineinschieben, damit keine Bläßchen entstehen); + Running Puffer, dann Elektrophorese (Proteine wandern durch das Gel, je mehr man ladet, desto schneller wandern sie); durchgelaufene Proteine auf Membran übertragen, also blotten (3 Filter + Gel + Membran + 3 Filter); Blocken (mit Milchpulver); "Waschen" (mit Puffern); Membran in Falcons hineingeben + 1 Antikörper -> übernacht in Kühlkammer

Membrane herausnehmen, wieder waschen; 2 Antikörper drauf (warten 1h), waschen, ECL (ein Chemilumineszenz) auftragen, Membrane in Hypercassette tun + Filmpapier-> in Dunkelkammer entwickeln.

Ziel: Marker zeigt die kDas (also Protein Ladder) und die Proteine sollen dann am bestimmten Stellen sichbar sein (schwarze Banden). Verschieden große Proteine brauchen verschieden dichte Gele (je kleiner, desto dichter).

Bradford Test:

Proteine (in aufsteigender Menge, also 0, 5, 10, 15 etc. mikrometer) werden in Säulen hineinpepittiert; + CBBG ; mixen; nach der Reihe in einer Maschine photometrisch gemessen.

Ziel: Maß für die Proteinkonzentration der Lösung bestimmen. (wird daher manchmal vor Western Blot gemacht)

Zellen Splitten:

Es gibt schwimmende Zellen und am Bodenhaftende Zellen, daher gibt es auch 2 verschiedene Methode wie man sie splittet.

"bodenständige Zellen": altes Medium wegsaugen; + 10ml PBS (damit kein Medium mehr übrigbleibt); PBS wegsaugen; Trypsin (2ml) löst die Zellen vom Boden (5min warten, 37°); + neues Medium (ca. 10ml); splitten (1:2 oder 1:3, kommt drauf an wie schnell sie wachsen); in neuen Petrischalen + neues Medium; in Inkubator stellen

"schwebende Zellen": Zellen von Kulturflaschen in Falcons überführen, zentrifugieren; Medium vorsichtig absaugen; PBS; + neues Medium; splitten;l in neue Petrischale; + neues Medium

Meine Gruppe (CeMM ist in verschiedenen Forschungsgruppen eingeteilt) beschäftigt sich mit Proteomik. D.h. die Beziehung zwischen Drugs (also Medikamente) und Proteine wird sehr genau erforscht, wobei hauptsächlich krebsheilende Drugs untersucht werden. Ein Beispiel dafür wäre die Bcr-Abl Kinase, welche häufig bei Patienten mit Leukämie gefunden wird. (http://de.wikipedia.org/wiki/BCR-Gen) Wenn ein Drug sich besser an Bcr-Abl bindet als ATP, werden die Proteine, die für Leukämie wichtig sind, nicht hergestellt und somit wird diese Krankheit geheilt. Meistens aber inhibieren die Drugs nicht nur die Proteine, welche für die Krankheit verantwortlich sind, sondern auch die, die keinen Einfluss auf die Krankheit haben, was schlimme Nebenwirkungen hervorrufen könnte. Um eine bessere Heilung zu fördern, werden daher die"targets" der Drugs zuerst gesammlt und dann spezialisiert.

zunächst will ich mich dafür entschuldigen, dass ich nicht schon eher etwas geschrieben habe. Denn Frau Tumpej hat ja in ihrer Email angemerkt, dass man am besten "regelmäßig protokollieren" sollte.

Nun. Ich bin kein großartiger Schreiber und es ist mi schon immer schwer gefallen regelmäßig etwas zu schreiben. Daher versuche ich nun alles in einem (oder höchstens 2 oder 3) Post(s) zu erledigen.

heute ist übrigens mein vorletzter Tag hier in CeMM.

Gut, fangen wir mal an:

zuallerest: das Praktikum hier in CeMM hat mir sehr sehr gut gefallen und ich kann es nur weiterempfehlen!

CeMM, oder auch Research Center for Molecular Medicine, ist ein internationales, unabhängiges Forschungszentrum. Wenn das nicht klar genug ist, dann google es mal, oder geh auf dieser Seite: http://www.cemm.oeaw.ac.at/, dort findet man fast alles, was es zu wissen gibt.

Da es, wie bereits erwähnt, ein internationales Forschungszentrum ist, ist die Arbeitsprache hier logischerweise englisch. Alle Meetings, Presentationen und Besprechungen werden in englisch gehalten. Am Mittwoch findet immer ein Gruppenmeeting und am Freitag eine große Presentation statt. Die Wissenschaftler presentieren dann ihre aktuellen Forschungsergebnisse und die Diplom Studenten/ PhD Studenten ihre Arbeit. Meinungen werden ausgetauscht und Ratschläge werden gegeben. Die Leute hier sind alle sehr freundlich und hilfsbereit. Besonders das Arbeitsklima ist sehr lobenswert.

Das "neue" Gebäude von CeMM befindet sich auf das Gelände des Allgemeinen Krankenhauses und der Medizinischen Universität und besteht aus acht Ebenen sowie zwei Untergeschoßen und einem Dachgeschoß. Es ist modern und der Ausblick vom Dach ist atemberaubend.

Abgesehen von dem neuen Gebäude und dem schönen Ausblick, gefällt es mir besonders gut, dass man fast immer bei irgendwelchen Experimenten zuschauen kann bzw selbst etwas rumprobieren darf. Auch die neuen Geräte in CeMM sind äußerst modern und interessant. In diesen 4 Wochen hatte ich einen sehr tiefen Einblick in der molekular-biologischen Forschung gewonnen und vieles dazu gelernt.