Von unserer Großexpression haben wir ein gel gegossen um zu sehen wieviel protein entstanden ist.
Die zellen der expression haben wir sonifiziert=Aufbrechen der Zellen mit Hilfe von Ultraschall.
um sie danach zu reinigen um die lipide zu entfernen.
Heute lösen wir die Inclusion Bodies und weren eine trafo machen und das volumend er Rückfaltung einengen.

Um die effizienz unserer elektrokompetenten Zellen zu messen haben wir eine Trafo gemacht und danach die zellen ausplatiert. Nach dem Wochenende haben wir dann die Anzahl der Klone gezählt und auf die Anzahl der Zellen in einem Eppi zurückgerechnet.
gestern haben wir auch noch einen Puffer zum Rückfalten von Proteinen hergestellt und auf 4 Grad gekühlt.

Gestern haben wir die Elektrokompetenten Zellen gewaschen, und eingelagert. Nebenbei haben wir das Proteingel der Expression laufen lassen um die Menge des Proteins zu sehen. zudem haben wir von der PCR Minipreps(Säubern) gemacht und diese heute nach einem Verdau auf ein DNA-Gel aufgetragen. danach haben haben wir mit Hilfe des PHotometers die DNA- Konzentration in den Pet22b Zellen gemessen.
Und zum Schlkuss haben wir noch neue LB Platten gegossen

Gestern begann mein Praktikum im Forschungszentrum der Uni Salzburg in der Billrothstrasse.
Ich absolviere mein Praktikum im Bereich der Strukturbiologie.
Gestern habe wir begonnen Elektrokompetentezellen herzustellen. Dafür haben wir zuerst ein SOB Medium und einen Wash Buffer hergestellt. Das Medium wurde danach flüssig autoklaviert. Zum vermehren der elektrokompetenten Zellen haben wir diese auf einem festen Medium ausplattiert.
Nebenbei haben wir eine schon vorhandene PCR aufgereinigt.. Dafür haben wir die Zellen elektroporiert. das heißt wir haben ihnen einen Stromstoß versetzt damit sich die Membran öffnet und das gewünschte Plasmid aufnehmen kann. = Transformation. Nach einiger Zeit haben wir auch diese Zellen ausplattiert.
Als letztes begannen wir gestern die Expresssion (Proteinherstellung) für heute vorzubereiten.
Dafür haben wir die Vorkultur angeimpft und über Nacht wachsen lassen.
Heute haben wir zuerst das LB-Medium mit Ampicillin versetzt und danach die Zllen der Vorkultur in unsere Kolben mit Medium gegeben. Dort wachsen sie wieder bis sie eine bestimmte zelldichte erreicht haben. Diese messen wir stündlich mit hilfe der OD600-Kontrolle. Dabei wird die Lichtabsorbation der Probe gemessen. Je mehr absorbiert wird desto mehr Zellen sind schon vorhanden.
Sobald die Zelldichte erreicht ist wird IPTG (setzt Proteinsynthese in Gang) zugegeben und wieder wird stündlich eine Probe entnommen und aufbewahrt. Diese Proben werden danach auf ein Gel gegossen.
Als letzter Schritt werden die Zellen geerntet un eingfroren.