Heute haben wir wieder die Protein- und die Triglyceridkonzentrationen in den Zellfraktionen bestimmt und eine HPLC durchgeführt.
Die Ergebnisse der Bestimmungen fiehlen ähnlich gut wie letzte Woche aus!!
Morgen folgen noch die HPLC-Auswertung und eine Cholesterin-Bestimmung, dann ist das Projekt und leider auch meine Praktikumszeit abgeschlossen.

Der heutige Tag ist ein sehr theoretischer. Achim hat mich dazu "überredet", schon während der Arbeitszeit meine Dokumentation zu beginnen.
Auch gut, dann muss ich zu Hause nicht so viel Zeit investieren. Trotzdem hätte ich lieber Eli und Achim geholfen.
Die beiden haben heute die HSC (sie leben noch^^) geerntet und ausgeschlossen. Im Moment zentrifugieren die Zellen.
Hoffentlich wird der Nachmittag ereignisreicher :)

Heute haben wir hauptsächlich in der Zellkultur gearbeitet.
17 der 18 Flaschen (eine brauchen wir zum Weiterzüchten der Zelllinie) Sternzellen haben wir mit Ölsäure und Retinol beladen. Allerdings waren einige Flaschen schon problematisch dicht, da wir sie am Freitag anscheinend nicht stark genug gesplittet haben. Vermutlich aus diesem Grund haben sich nach dem Beladen in 4 der beladenen Flaschen die Zellen vom Boden abgelöst. Diese Flaschen sind natürlich unbrauchbar, mit ihnen kann nicht mehr gearbeitet werden. Bei der Flasche, die wir weiterzüchten wollten, haben sich auch Zellen abgelöst, wahrscheinlich weil sie vor dem Mediumwechsel schon "kaputt" waren.
Hoffentlich leben die Zellen in den 13 verbleibenden Flaschen noch, dann können wir sie ernten und aufschließen.
Weiters haben wir die 5 AML-12 Flaschen auf 7 gesplittet. Die AML-12 Linie gehört allerdings nicht direkt zu unseren Forschungen, sondern zu Renates.
Außerdem haben wir einen Western Blot mit den Fraktionen der letzten Woche angesetzt.
Damit wollen wir überprüfen, wie rein die einzelnen Fraktionen sind. Ein Ergebnis gibt es morgen.
Bis dahin heißts also warten und versuchen herauszufinden, was mit den HSC-Zellen heuite Vormittag passiert ist :)

Wie letzten Freitag durfte ich auch heute schon zu Mittag nach Hause gehen, da wir nur in der Zellkultur zu tun hatten.
Die AML-12 Zellen haben wir 1:5 gesplittet, wir haben jetzt also 5 Flaschen davon.
Die HSC-Zellen haben wir von 6 auf 18 Flaschen gesplittet, um wir am Montag damit weiterarbeiten zu können.
Außerdem haben wir die HPLC von gestern ausgewertet und echt tolle Ergebnisse bekommen:
In den LDs war bei Weitem der meiste Retinylester enthalten!!

Leider sind schon 2 meiner 3 Praktikumswochen um, irgendwie schade. Die Zeit ist eigentlich viel zu schnell vergangen, bis jetzt hab ich schon so viele spannenden Dinge miterlebt und auch vieles gelernt!!

In den letzten 2 Tagen sind Abläufe vorgekommen, die ich im Prinzip schon letzte Woche beschrieben habe.
Zu allererst haben wir gestern die aufgeschlossenen Zellen eine Stunde lang zentrifugiert, um die Lipid Droplets vom Rest trennen zu können. Nach dem Zentrifugieren bildet sich eine weiße Schicht, die oben aufschwimmt, das sind die LDs. Damit die Probe der LDs rein(er) wird, haben wir Saccharose und Puffer B dazugegeben und wieder eine Stunde lang zentrifugiert. Diesen Vorgang nennt man auch „washing step“- die LDs werden gewaschen, damit die weiteren Arbeitsschritte bessere und genauere Ergebnisse liefern können.
Nach dem Waschen werden dann Proben der Lipid-Droplet-Fraktion genommen.
Gleich anschließend haben wir dann eine Protein- und eine Triglyceridbestimmung durchgeführt, die Ergebnisse waren zufriedenstellend: In den LDs fad sich mehr Triglycerid als irgendwo sonst, im Cytosol waren praktisch keine Triglyceride vorhanden. Die Proteinbestimmung zeigte, dass in der Membran, im Lysat und im Cytosol erwartungsgemäß viele, und in den LDs erwartungsgemäß wenige Proteine vorhanden sind.
Im Bezug auf die AML-12 Zellen, die ja infiziert sind, haben wir gestern etwas nicht Unbedeutendes herausgefunden: Es sind eigentlich keine AML-12 Zellen!^^
Da ist beim Auftauen der Zellen (für die Zellkultur werden sie gefroren geliefert und bei Bedarf aufgetaut) wohl ein Fehler passiert. Allerdings hat uns Renate die richtigen Zellen aufgetaut und wir hoffen, dass wir bald mit ihnen arbeiten können.
Außerdem haben wir gestern noch mal eine Mikroskopie der mit Ölsäure und Retinol beladenen Zellen gemacht. Der Vorteil diesmal war, dass die Zellen nicht so dicht waren und wir deshalb mehr erkennen konnten als beim letzten Mal.

Heute Früh haben wir die Bestimmungen von gestern ausgewertet (Ergebnisse siehe oben) und dann mit der HPLC-Vorbereitung begonnen, also die Proben gleich wie letzte Woche präpariert. Nur dass wir diesmal nur die Hälfte an LDs einsetzen und das beim Auswerten berücksichtigen, damit wir nicht so viel Material brauchen. Außerdem haben wir beim Retinolstock mehr verschiedene Verdünnungen, nämlich 0,1µM; 0,5µM; 1µM und 5µM.
Im Moment läuft die HPLC noch, deshalb habe ich auch schon jetzt Zeit, zu schreiben.
Für den heutigen Nachmittag haben wir noch folgendes vor:
1) HSC-Zellen: 1:2, das heißt aus drei Flaschen werden sechs.
2) HPLC: Ergebnisse dokumentieren, Auswertung folgt morgen.
3) AML-12 Zellen: Medium tauschen