Heute stand die Auswertung der Versuche mit Ethanol und DMSO auf Zellen im Excel auf dem Programm sowie die Kontrolle der isolierten Plasmid-DNA auf Reinheit durch photometrische Bestimmung, wobei das durch die Absorption bei verschiedenen Wellenlängen bestimmt wird (Verhältnisse der Absorptionen bei verschiedenen Wellenlängen zu einander ist entscheidend). Durch anschließende Verdünnung wird dies nochmals nachkontrolliert.

Die Aufgaben an diesem Tag waren: Western Blot fertigstellen (Antikörper zugeben, Detektion) und die Bakterien, welche mit Plasmid-DNA verpflanzt wurden, auf die erfolgreiche Funktion zu kontrollieren. Hierbei wird die DNA (die sich durch die Zellteilung der Bakterien bei der Kultivierung vermehrt haben) isoliert. Somit kann man aus die Plasmid-DNA vermehrt herstellen.

An diesem Tag bereitete ich Bakterien auf, in der wir Plasmid-DNA einpflanzten (Fortsetzung von Dienstag). Anschließend kultivierten wir diese Zellen und arbeiteten sie für die Kontrolle auf.
Eine weitere Aufgabe war die erneute Durchführung eines Western Blots und das Aufbereiten der Zellen für eine Phosphorylierung, wobei wieder häufiges Pipettieren notwendig war. Anschließend führte ich eine Proteinbestimmung nach Bradford durch.

Heute führte ich einen Mediumwechsel für verschiedene Zellen durch. Hierbei wurde das alte Medium entfernt und durch ein neues ersetzt, wobei ich bei der einen Zellkultur zusätzlich etwas DMSO (Dimethylsulfoxid) und bei dem anderen Versuch Ethanol hinzugab.
Später begannen wir mit der Zelltransferierung, wobei Bakterien Plasmid-DNA zugefügt wird, die mit einem bestimmten Gen kloniert (Ampicillin-Resistenz) wurden, damit die Bakterien die Plasmid-DNA akzeptieren, weil sie sie benötigen. Dieses Experiment wird wiederum einige Tage benötigen.

Mein Betreuer Andreas ist diese Woche auf Heimurlaub in Griechenland, weswegen ich meine Arbeit in dieser Woche mit Dr. Frederic Santer mache. Die Arbeit wird somit diese Woche auf Deutsch durchgeführt.
Heute führte ich Versuche zur Sterberate von Zellen mit verschiedener Behandlung durch. Diese wird mittels Photometer durch das ausgesendete Licht der Zellen festgestellt.
Generell ist das Arbeiten im Labor sehr lustig und informativ. Besonders die gemeinsamen Pausen (Kaffee- und MIttagspause)erweisen sich als schöne Abwechslung zum Laboralltag. Grundsätzlich gilt die inoffizielle Verpflichtung eines jeden Praktikanten vor Ende des Praktikums einmal einen Kuchen mitzunehmen, weshalb auch das gesellschaftliche Beisammensitzen nicht zu kurz kommt.

Heute führte ich die Real-Time PCR durch, wobei hauptsächlich das Pipettieren auf dem Programm stand. Verschiedene Puffer mussten, einer gewissen Reihenfolge entsprechen, der isoltieren RNA zugeführt werden, um dann anschließend die cDNA-Synthese, welche für die Real Time PCR benötigt wird, ausführen zu können.
Die cDNA dauerte gute 2 Stunden und wurde von einem Gerät durchgeführt. Die Vorbereitung der Real Time PCR war wiederum das Pipettieren. Der anschließende Hauptvorgang für die PCR wurde vom Gerät selbst durchgeführt und dauert das Wochendende über an.

An diesem Tag beendete ich die WesternBlot Analyse vom Vortag und wertete diese aus.
Die Proteine waren nun der Größe nach aufgetrennt und die Menge an Androgen Rezeptor konnte nun festgestellt und aufgrund der Intensität der AR "Flecken" statistisch ausgewertet werden.
Am Nachmittag führte ich eine RNA-Isolation durch, um später mit der cDNA-Synthese und der Real-Time PCR fortzufahren.