Am freitag habe ich herausgefunden, dass man den CYP2C19 Genotyp auch mit dem Universal Mix verarbeiten kann. Diese Methode fgeht um einiges schneller und man kann diese Untersuchung auch leichter zur Routineuntersuchung dazugeben.
Am Montag habe ich eine Routine gemacht, das Ergebnis bekomme ich aber erst heute. Mal schauen, ob alles funktioniert hat :)

Und die DNA war rein :) es hat alles gepasst. Dann habe ich DNA Proben auf ein erhötes Risiko von Laktose intoleranz getestet (LCT) ich habe kein erhötes Risiko :) Heute teste ich gerade CYOC19 *2 und *3 (Clopidrogel) Das ist ein häufig eingesetzter Thrombozyten-Aggregationshemmer. Bei Menschen die eine defekte Variante des CYPC19 haben, kann eine Dosisanpassung oder der Umsrieg auf ein anderes Medikament in Erwägung gezogen werden. Leider werden solche Medikamente gleich verschrieben, ohne einen Test zu machen und deswegen bekommen viele Menschen Nebenwirkungen davon.
Viel besser wäre es natürlich wenn jeder Patient, der solche Medikamente nehmen muss, zuvor so einen Test machen würde, denn dann wüsste er, ob er es verträgt oder nicht.

Gestern habe ich einmal einen Rundgang durch das ZMF gemacht und meinen Chef Dr. Renner kennengelernt.
Heute habe ich aus 6 verschiedenen Bllutproben die DNA isoliert. zuerst habe ich 0,2 ml Vollblut in ein Reaktionsgefäß pipettiert. Danach gab ich 0,02 ml Protease K dazu. Dies wurde zusammen mit einem Buffer bei 58 °C inkubiert. Nach 3 Waschgängen mit unterschiedlichen Buffern eluierte ich TrisHCL und die DNA löste sich. Um zu kontrollieren ob die DNA rein genug ist, setzte ich eine PCR an.
Über das Ergebnis werde ich dann morgen berichten .

Am Donnerstag habe ich wieder iene PCR (DPYD, MTHFR) gemacht und habe leider die falschen Kontrollen bekommen. Die Auswertung war dann natürlich unbrauchbar und so habe ich am Freitag wieder alles neu gemacht. Dann habe ich am Freitag eine Untersuchung auf (TPMT, HFE) gemacht. HFE ist eine Eisenstoffwechselerkrankung und TPMT dient zum Abbau von Thiopurin was für die Behandlung von z.B. Darmerkrankungen notwendig ist.
Ich muss sagen dass ich mit dem Pipettieren keine Probleme mehr habe und mir die Arbeit sehr viel Spaß macht. Ich bin schon gespannt was ich in der 2. Woche alles machen werde ;)

Heute habe ich meine eigene DNA isoliert. Das habe ich mit dem Magna Pure gemacht, wo ich mein Blut, Spitzen und die Reagenzien einsetzte. Nach ca. 40 min. war nur noch die DNA übrig. Aus 200μl Blut wurde 100μl Elution.
Ich habe mich auf den Faktor V und den Faktor 2 getestet
Danach habe ich selbst einen MasterMix hergestellt: 54μl Wasser, 90μl UniversalMasterMix und 18 μl Assay Mix. Das habe ich dan auf eine 96er-Platte gegeben: Für den Faktor 2 jeweils die verschiedenen Proben zu dem Wildtyp, heterozygoten Typ und homozygoten Typ und einmal destilliertes Wasser. In die anderen kam meine DNA. Dasselbe habe ich mit dem Faktor 5 gemacht. Dann habe ich überall 15μl Öl pipettiert. Nachdem ich alles mit der PCR Folie abgeklebt habe, habe ich die Platte in den Thermocycler gegeben. Hier sind nämlich verschiedene Temperaturzyklen möglich. Bei der Denaturierung werden 96°C, beim Annealing 45-65°C und bei der Extension 65-72°C benötigt. Nach einer Stunde nahm ich die Platte heraus und gab sie in den TaqMan hinein. Der TaqMan arbeitet mit 2 Fluoreszenzfarbstoffen, die ich dann durch Zahlen und graphischen Darstellungen sichtbar machen konnte.
Mein erster Versuch der PCR ist mir recht gut gelungen und ich freue mich schon auf weitere Untersuchungen ;)