Heute, am 15.07.09 haben wir richtig mit dem Arbeiten an der DNA begonnen.
Gleich am Morgen ließen wir Nickelt und Tris von gestern auftauen und machten daraus dann ein Sample am AFM Gerät 6.
hier die Lösung: 100µl Wasser und dies vermengen mit jeweils 100µl Tris und Nickel.
Dazu haben wir Rhizavidin gegeben (5µl Portion mit 5,5 mg/ml)
Inkubationszeit (!)

Nun kam der Tris-Nickel Puffer dran, den wir dann zum Waschen vom Sample benötigten. Ich durfte also 500µl Tris und 100µl Nickel zusammenmischen und das ganze auf 50 ml mit Wasser bringen.

Kraftsprektroskopie Avidin-Biotin:
Das praktische an unserer speziellen Methode ist, wie auch gestern oder so schon erwähnt, dass man nur einen Waschgang braucht wenn man mit unserer speziellen Metode arbeitet und die Inkubationszeit ca eine halbe bis dreiviertel Stunde dauert, nicht so wie bei den normalen (2 Stunden).Somit geht alles viel schneller.


Jetzt mussten wir die Spitzen mit Chlorophorm waschen. Das übernahm aber dann doch Mike. Er trocknete die Chips mit Stickstoff und nachdem eine spezielle Lösung draufgegeben wurde, folgte die Inkubationszeit. Also eine kurze Verschnaufpause für uns.

Nach der Pause wurde das Sample mit dem von mir zubereiteten :D Puffer gewaschen und die Spitzen mit PBS-Puffer.

Cantilever eingespannt und los ging es.
Aber Achtung: Die spezielle Lösung darf nicht trocken werden, Biotin würde das aushalten, aber man sollte halt darauf achten, dass man möglichst schnell arbeitet.

Beim ersten Durchgang kamen leider keine Bindings zustande, aber wir arbeiteten heute auch mit alten Spitzen, weshalb Mike uns vorher schon gesagt hatte, dass er nicht glaube, dass wir viel sehen.
Na ja, Spitze wechseln und weiter gehts :)

Was ich heute gelernt habe:
Lektion 1: Eine Gans hat nur 2 Füße :D
...Katrin zeichnet eine Gans: "He, wie viele Füße hat eigentlich a Gans? 2 oder 4?" :D:D

Danke für die Aufmerksamkeit und bis morgen dann ^^