am 9. tag meines praktikums haben wir denselben assay vom tag 7 noch einmal angesetzt. denn umso öfter man den versuch durchführt, desto besser kann man die ergebnisse überprüfen oder vergleichen. der einzige unterschied ist, dass nun die zellen 2 tage älter sind.
anschließend durfte ich meine adhärenten zellen (also meine HEK-zellen) splitten. dazu saugte ich zuerst das medium ab und pipettierte 1ml Trypsin dazu. das bewirkt, dass sich die zellen von dem Flaschenboden lösen. danach werden 9ml neues medium dazugegeben, was die wirkung von trypsin stilllegt. das ganze gemisch wird dann in einem falcon zentrifugiert und danach wird der überstand wieder abgesaugt und das pellet bleibt über. 18ml medium kommen nun wieder in die ursprüngliche flasche. davon entnimmt man 1ml und resuspendiert damit das pellet. je nach dem wie stark man die zellen splitten will, entnimmt man nur einen teil von den resuspendierten zellen und pipettiert sie zurück in die flasche. pro tag kann man rechnen die zellen 1:2 zu splitten.
danach war es an der zeit die proteinkonzentration vom lysat vom ersten assay zu messen. ein lysat ist eine zelle, aufgelöst in ihre bestandteile, in eimem lysisbuffer. die messung geschieht nach der Bradford-methode, das heißt ich habe etwas bradford-reagenz zu den lysaten gegeben und die flüssigkeit verfärbt sich durch die proteine von braun zu blau. je nach dem wie blau die flüssigkeit ist, kann ein gerät die proteinkonzentration messen. dieses gerät wird ELISA-reader genannt.
die daten analysierte ich anschließend mit excel und erstellte auch diagramme :D
damit war der tag auch zu ende.