Da das Ergebnis der Transformation vom Vortag nicht eindeutig ist, habe ich heute die Transformation mit Produkten aus der Ligation, die über Nacht noch einmal gelaufen ist, wiederhohlt.

Am Vormittag habe ich noch die TEV-Plasmidringe mit dem QIAGEN-Plasmid Midi Kit geprept und die Konzentration der Plasmid-DNA gemessen.

Claudia hatte schon am Montag HaCats(mit Dox induzierbare) mit NTAP-Gli1-Plasmidringen transformiert, auf 6-well-Platten ausgesät und am Mittwoch die Hälfte der Proben mit Dox induziert. Das heißt, die Hälfte der Zellen sollten exogenes Gli1 gebildet haben, die andere Hälfte nicht. Heute durfte ich die Zellen mit Laemmli-Puffer ernten und für später tiefkühlen.

Außerdem stand heute eine SDS-Page auf dem Programm.

Beim Reinigen der TAP-getaggten Proteine, kann sich in manchen Fällen IGg von den Sepharose-Kügelchen lösen, die zu Reinigung verwendet werden. Dieses IGg (Imunglobulin G) stört später bei der Massenspektrometrie. Daher hat meine Betreuerin versucht, dieses Ablösen durch eine Vorbehandlung der Sepharose zu verhindern.

Ich durfte beim Vorbereiten der Proben, des Proteingels und bei der anschließenden Silberfärbung helfen.