Für die Proteinreinigung impften wir nun120 ml Medium mit der Über-Nacht-Vorkultur an. Dann inkubierten wir die Kultur auf 37°C bis eine genügend hohe Zelldichte hatte (OD600 bei 0,5).


Als nächstes induzierten wir die TEV-Expression durch Zugabe von IPTG. Die Inkubationstemperations wird auf 30°C reduziert, sodass die Zellen vor allem TEV produzieren und sich kaum mehr teilen. Nach jeweils einer Stunde entnahmen wir eine Probe, mit der wir später überprüfen, wie die Proteinexpression verlaufen ist. Nach 3h ernteten wir die gesamte Kultur ab.

Als nächstes lysierten wir die Proben mit Laemmlipuffer und Ultraschall.

Dann kam die eigentliche Proteinreinigung mittels Affinitäts Chromatografie (Co-Ssepharose). Dabei wurde die Probe mit verschiedenen Puffern gewaschen. Nach jedem Waschen entnahmen wir den Überstand.



Die Proben, die wir aus den Überständen gewonnen hatten trugen wir auf ein Proteingel auf. Darauf wurde sichtbar, in welchen TEV enthalten ist.



In den Wartezeiten ließ ich nocheinmal eine Photoplatte vom Westernblot für 1 Stunde belichten bevor ich sie entwickelte. Durch die längere Belichtungszeit sollen bestimmte Banden noch besser sichtbar werden.