Midi-preparation (Plasmid-DNA-Isolierung)
13:18 / 18.06.2010
-LB Medium + Ampicillin mit Bakterien impfen, über Nacht bei 37°C im Shaker inkubieren.
- Zentrifugieren, Pellet setzt sich ab
-In geeigneten Pufferlösungen resuspendieren
-Zelllyse (Zentrifuge), Auflösen der Zellmembran
- Eluieren der DNA durch Filter
- Präzipitaion, Fällung der DNA durch Isopropanol
- Waschen mit 70% EtOH
- trocknen lassen
- in geeignetem Puffer wieder lösen
- Zentrifugieren, Pellet setzt sich ab
-In geeigneten Pufferlösungen resuspendieren
-Zelllyse (Zentrifuge), Auflösen der Zellmembran
- Eluieren der DNA durch Filter
- Präzipitaion, Fällung der DNA durch Isopropanol
- Waschen mit 70% EtOH
- trocknen lassen
- in geeignetem Puffer wieder lösen
ELISA
-56ul capture Antibody + 10 ml PBS --> 100ul per well
-3x waschen (PBS)
- 1g BSA/100 ml PBS --> 150ul per well, ~30 min inkubieren, waschen
- Antigen IL-6: Verschieden hoch konzentrierte Proben, Mikrotiterplatte mit verschiedenen Proben versehen, inkubieren, waschen
- detection antibody + PBS hinzufügen, inkubieren, waschen
- Strepavidin-HRP hinzufügen, inkubieren, waschen
- Substrat Solution hinzufügen, inkubieren (Licht meiden!) --> Farbreaktion blau
- Stop Solution (Schwefelsäure) --> Farbumschlag gelb
- Bestimmung der optischen Dichte