Protokoll ist nun schon fast fertig, ergebnisse werden noch fertig gemacht. Heute hab ich eig. wieder bei der Proteinbestimmung nach Bradford mitgeholfen. Außerdem hab ich einen Mediumwechsel bei den T-Zellen durchgeführt. Die drei Wochen sind ziemlich schnell vergangen muss ich sagen. Insgesamt bin ich äußerst froh dieses Praktikum gemacht zu haben, da ich eine Menge gelernt habe- das Beste ist das ich das tatsächlich mal im Studium lernen werde, nun hab ich bereits Ahnung davon und habe u.a. Pipettieren geübt. Vielen Dank an Michaela, die mir stets mit viel Geduld alles erklärt hat und mich bei einigen Methoden mitarbeiten ließ. Ich danke auch Dr. Birgit Strobl, die mir das Praktikum ermöglicht hat. Dankeschön an viele andere von der Abteilung Tierzucht und Gentik, die mich freundlich willkommen hießen. Es war eine echt spannende Zeit und ich kann jedem empfehlen so ein Praktikum zu machen!! Pamela

Endlich durfte ich alle Tiere bestaunen, die sich an der Uni befinden und das sind ziemlich viele muss man sagen. Beagles, Lamas, Schafe, Ziegen, Vögel, Fische, Pferde, Esel und sicher noch andere befinden sich auf dem Unigelände. Echt faszinierend, während ich heute am Protokoll gearbeitet hab, konnte ich die Schafe mähen hören. So etwas gibts eben nur auf der VetMed! Nirgendwo kann man besser entspannen während der Pause als dort, da es dort so viel Grün gibt und eben viele verschiedene Tiere.
Am Western Blot haben wir auch weiter gearbeitet und ich durfte mit Viren infizierte Zellen unter dem Mikroskop sehen- interessant:) Nebenbei führte ich noch einen Mediumwechsel für die bone marrows durch, die schion ziemlich gewachsen sind. Morgen werden wir ein Foto von ihnen und den T-Zellen machen- dies alles dank eines speziellen Mikroskops mit eingebautem Fotoappart. Echt cool so ein Gerät;) Bis morgen!

Der Tag hat damit begonnen, dass wir T-Zellen passagiert und einen drei Viertel Mediumwechsel durchgeführt haben. Ich konnte sie ein weiteres Mal im Mikroskop betrachten: Sie sind unheimlich schnell gewachsen! Beim großen Gel konnte ich wieder einen weiteren Antikörper hinzufügen, den anti Stat1 alfa und beta. Die Membran lassen wir nun über Nacht bei 4 Grad stehen. Außerdem haben wir bisherige Ergebnisse der Western Blots ausgewertet (sind nun schon ziemlich viele geworden) und uns um zahlreiche Mäuse gekümmert. Dabei konnte ich die kleinen Mäusebabys betrachten und habe festgestellt, dass wieder einige dazugekommen sind. Zwei männliche Mäuse mussten jedoch getrennt werden, da sie untereinander rivalisiert haben. Die Arbeit am Protokoll schreitet nun weiter voran, schließlich sollte ich bis Freitag fertig werden. Bis morgen!

Diesmal haben wir beim großen Gel, bei dem wir ja das IFN beta signaling testen wollen, den zweiten Antikörper raufgegeben, den anti rabbit IgG-HRP. Die Proben haben wir mittels ECL entwickelt . Die Ergebnisse waren insgesamt sehr gut: wir konnten eine schöne phosphorylierung von Stat 1 alfa und beta sehen. Wildtyp: sehr schöne Phosphorylierung, Ketui und Knock-out: schwächer als beim Wildtyp aber zwischen beiden kein Unterschied. Außerdem hat man keinen Unterschied zwischen mit und ohne Inhibitor Behandlung gesehen, Bei der Immunpräzipitatiion von Tyk2 (IP-tyk2) haben wir diesmal einen neuen Antikörper ausprobiert und waren sehr gespannt auf die Ergebnisse. Wir konnten nur stauen, denn es sind diesmal sehr schöne und saubere IPs rausgekommen, mit wenig Background. Dies ist erfreulich, denn offensichtlich funktioniert der Antikörper sehr gut. Weitere Tests werden folgen!:) Nebenbei haben wir einiges eingescannt, an einem Konzept getüfftelt und in der Zwischenzeit hab ich begonnen zu schreiben- all dies für mein Protokoll, dass bald fertig sein sollte. Werden wir sehen, wie lange ich brauchen werde. Bis Morgen!

Heute haben Michaela und ich zwei kleine und einen großen SDS Page gemacht, das nichts anderes ist als eine andere Variante zur Analyse von Proteinen. Bei den zwei kleinen Gelen haben wir verschiedene IP (Tyk2) mit verschieden Antikörpern und Konzentrationen gemischt. Beim großen Gel wollen wir den Versuch vom 15.9.09 wiederholen (IFn beta signaling mit und ohne Inhibitor). Alle 18 Proben haben wir nebeneinander verteilt. Danach haben wir bei der Tyk2 IP den ersten Antikörper hinzugefügt. Den Antikörper vom IFN beta signalling mischten wir frrisch. Am Nachmittag haben wir von drei verschiedenen Maustypen (Knockout, Knock-in und Wildtyp) T-Zellen aus der Milz isoliert und frische Knockenmarkmakrophagen gespült (wieder aus den Hinterbeinen der Mäuse). Zum Schluss haben wir unsere bisherigen Western Blot Ergebnisse gescannt, damit ich sie einmal allen zeigen kann, nämlich in meinem Bericht. Bis Morgen!