Heute stellten wir - ziemlich alleine sogar - éinen Bilayer her. Und zwar so:
1. das Lipid DOPC wird in 1/3 Methanol und 2/3 Chlorophorm gelöst
2. die Lösungsmittel werden mit Stickstoff abgedampft
3. die Lipide werden in 200µl PBS Puffer gelöst
4. dann werden sie ins Ultraschallbad gegeben, damit sich Vesikel bilden, je länger sie im Bad sind, desto größer werden die Vesikel (die Lipide müssen "hüpfen" sonst bringt das bad nichts) für ca. 15 min
5. einstweilen richtet man die Kammern mit den Stempeln her
6. und man verdünnt die Farbstoffe, bei uns einmal das PGPE Alexa 647 (Oxlipid) 1:1000 und 1:100000 (rot), und das Bodipy DHPE 1:100000 und 1:1000000 (blau)
7. man gibt den Bilayer, nachdem er klar geworden ist, in die Kammern
8. ca. 15 min warten weil sich der Bilayer formieren muss
9. waschen mit Puffer
10. man gibt jeweils 10 µl der Marker drauf
11. man wartet ca. 15 min
12. nochmals waschen
dann kann man die kammern (mit Stempel und Bilayer drauf) ins Mikroskop geben
Wir wollten wissen, welche Diffusionsgeschwindigkeiten die Lipide haben und ob sie sich verändert. Mit dem blauen laser habenw ir leider keine guten Signale bekommen, mit dem roten aber schon und jetzt bin ich gespannt was herauskommt bei der Auswertung.