Der zweite Labortag ging gleich einmal mit der "Verdauung" der DNA-Sequenz los. Bei einer Verdauung wird eine gewisse Sequenz mit Hilfe von zwei Restriktionsenzymen an den Enden, den sogenannten Restriktionsschnittstellen, geschnitten. Somit kann diese Sequenz anschließend von einem bestimmten Plasmid aufgenommen werden. Wir haben also die Enzyme NheI und Mph1103I mit einem Puffer, das für eine gute Umgebung sorgt, und der DNA-Sequenz vermischt. Nach dreistündiger Verdauung habe ich noch den selbstgemischten blauen Farbstoff Loading dye hinzugefügt, damit die DNA auf dem Agarose-Gel sichtbar wird. Danach habe ich die verdaute DNA auf das Agarose-Gel geschüttet und die gestrige Messprozedur einfach wiederholt. Dieses Mal war die DNA-Länge um zirka 20 Basenpaare kürzer, da diese ja durch die Enzyme weggeschnitten wurden. Darüber hinaus habe ich die migrierte DNA unter einer UV-Lampe im Gel sehen können, und sie rausgeschnitten. Anschließend gelang es mir, die DNA durch die Zugabe zweier Lösungen und durch zahlreiche Zentrifugierungen von dem Gel-Stück zu befreien. Ich hatte aĺso heute viel zu tun!!

Der nächste Schritt war dann die Ligation, also das Einführen der DNA-Sequenz in das Plasmid pxG-10, das darüber hinaus auch ein Gen, das gegen das Antibiotikum Chloramphenicol resistent macht, besitzt. Dafür haben wir einfach die DNA mit dem Plasmid, einem Puffer und der Ligase vermischt. Ich werde aber leider erst übermorgen erfahren, ob diese Ligation auch wirklich geglückt ist, wenn die Zellen, in die wir morgen das Plasmid einführen, auch wirklich wachsen!!!