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Heute, am 7. Tag meines Praktikums, habe ich wieder von meiner eigenen DNA Proben erstellt. Dies ist mir auch sehr gut gelungen. Ich habe auch bereits zwei verschiedene Geräte zur Auswertung der DNA kennengelernt. Weiters durfte ich mit dem Magna Pure arbeiten. Dieses Gerät isoliert DNA.

Die letzten 1 1/2 Wochen waren sehr aufregend und spannend für mich. Ich lernte wie man DNA isoliert, Proben daraus macht und diese mit Hilfe der PCR und Taq Man Methode auswertet. Bei der PCR wird die DNA getrennt und durch Primmer und Polymerase in mehreren Zyklen in Cycler (Der Cycler sorgt für die passende Temperatur umn die DNA zu vervielfachen. Er kann sehr schnell zwischen hoher und niedriger Temperatur wechseln) vervielfacht. Bei Taq Man heften sich Sonden an die getrennte DNA, welche nach den Zyklen floureszieren, dadurch kann man bestimmte Merkmale auswerten. Dabei gibt es drei verschiedene Genotypen: 1. WT, 2. HT, 3. HM.
Bis jetzt habe ich nur manuell DNA isoliert, beginne aber schon mit dem Magne Pure zu arbeiten.
Es ist alles sehr interessant und neu für mich, aber meine Betreuer sind sehr nett und erklären mir alles ganz genau und lassen mich auch viel selbständig arbeiten.


Donnerstag und Freitag

Ich durfte DNA auf CMV testen.
Dazu gewann ich aus 2 x Blutplasma und 2 x Wasser (ist nötig) mit dem Magna Pur die DNA.
Danach pipetierte ich diese wie bei der PCR-Mathode mit Standard, -Mastermix-Öl in Platten.
Allerdings musste ich beim Pipetieren dieser Proben aufpassen und dies auch in einer "Isolierkammer" machen die danach mit UV-Licht bestrahlt wurde um alle Viren abzutöten.
Diese Proben wurden dann in den ABI Prism 7000 gegeben. Dieses Gerät ist ein real. time PCR Gerät, welches Nukleinsäure-Sequenzen diktiert und quantifiziert.
Es besteht aus: einem Thermacycler
einem Floureszensdetektor
einem spezifischen Applikationssysthem.
Nach jedem Zyklus wird die Floureszens gemessen und man kann den Verlauf des Anstiegs mitverfolgen. Ergebnisse sind sofort nach dem Lauf erhältlich, ohne nachträgliche Auswertung oder Reinigung.

Ich konnte heute wieder eine PCR ansetzen.
Diese haben wir über die Gelelektrophonese ausgewertet..
Dazu gossen wir das Argorosegel, welches wir aus 3,75 g Argorose und 0,5 x TBT 150 ml mischten und in der Mikrowelle erhitzten, in eine Platte. Dann steckten wir die Kämme hinein die die Slots bilden. Das Gel musste dann 30 Minuten trocknen.
Danach konnte ich die DNA mit Gelagebuffer versetzen und anschließend die Proben in die Slots pipetieren. Daraufhin wurde das Gel für 25 Minuten an den Strom angeschlossen. Danach konnten wir das Ergebnis auswerten.

Heute habe ich viel über die Polymerasekettenreaktion gelesen, aus Diplomarbeiten! Ich finde diese sehr interessant und ich konnte eine Menge daraus erfahren.
Weiters übte ich das pipettieren mit mehreren verschiedenen Pipetten, auch dies war sehr lustig.
Kurz zusammengefasst - mein 2. Tag im ZMF-Graz war sehr interessant und spannend. Ich hoffe, dass auch die nächsten Tage weiter so gut laufen.


Die vergangene Woche ist echt spitzenmäßig verlaufen.
Ich habe sehr viel über die DNA gelernt und mit Hilfe meiner Betreuerin DNA isoliert. Wir haben verschiedene Proben hergestellt und diese ausgewertet. Am Freitag durfte ich diese Arbeiten auch allein ausführen, was mir auch sehr gut gelang.
Ich freue mich schon auf die nächste Woche.


Heute habe ich eine 96er Platte Proben vorbereitet.
Ich stellte den Mastermix her, pipetierte je 2 microl. DNA, 3 microl. Mastermix und 15 microl. Öl in die Platte. Danach kam diese in den Cycler.
Heute habe ich auch DNA aus meinem Speichel gewonnen, indem ich einen Tupfer an meiner Wangeninnnenseite abrieb und diesen dann in 400 microl. Wasser einweichte. Anschließend habe ich die DNA händisch isoliert.